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案例說明
炙淫羊藿（淫羊藿）配方顆粒試樣經(jīng)25%乙醇溶液超聲提取后，采用梯度洗脫，用紫外檢測器測定。炙淫羊藿（淫羊藿）配方顆粒應(yīng)呈現(xiàn)8個特征峰。
分析條件
色譜柱：Kromasil 100-5-C18，4.6x250mm （訂貨號：M05CLA25）
流動相：（A）乙腈 （B）0.1%甲酸溶液
按下表進(jìn)行梯度洗脫：
時間/min | 流動相A（%） | 流動相B（%） |
0 | 15 | 85 |
25 | 25 | 75 |
38 | 25 | 75 |
50 | 40 | 60 |
55 | 40 | 60 |
65 | 65 | 35 |
66 | 15 | 85 |
70 | 15 | 85 |
流速：1.0mL/min
進(jìn)樣量：10μL
柱溫：30℃
波長：270nm
分析圖譜
根據(jù)上述色譜條件， 分別將參照物溶液與供試品溶液注入液相色譜儀進(jìn)行測定。參照物溶液的色譜圖如圖1所示，色譜圖積分結(jié)果見表1。
表1參照物溶液色譜圖積分結(jié)果
目標(biāo)物 | 保留時間 | 峰面積 | 峰高 | 理論塔板數(shù) | 分離度 | 對稱/拖尾因子 |
朝藿定C | 42.050 | 3027.357 | 112.524 | 56376 | - | 0.96 |
淫羊藿苷 | 44.433 | 11222.050 | 750.508 | 208317 | 4.34 | 0.88 |
寶藿苷Ⅰ | 63.000 | 1248.856 | 173.548 | 1873426 | 64.76 | 1.00 |
由表1中數(shù)據(jù)可知，淫羊藿苷的理論塔板數(shù)為208317，滿足《炙淫羊藿（淫羊藿）配方顆粒》中規(guī)定的不應(yīng)低于 1500的要求。
供試品溶液的色譜圖如圖2所示，色譜圖積分結(jié)果見表 2
表2 供試品溶液色譜圖積分結(jié)果表
目標(biāo)物 | 保留時間 | 峰面積 | 峰高 | 理論塔板數(shù) | 分離度 | 對稱/拖尾因子 |
1:朝藿定A | 37.275 | 806.789 | 36.726 | 68232 | - | 1.00 |
2:朝藿定B | 39.508 | 3745.575 | 156.529 | 62959 | 3.72 | 0.96 |
3:朝藿定C | 42.250 | 1390.918 | 51.660 | 55528 | 4.07 | 0.93 |
4 | 43.717 | 697.871 | 41.937 | 152695 | 2.52 | 0.97 |
5(S):淫羊藿苷 | 44.542 | 5282.503 | 365.718 | 219949 | 1.99 | 0.91 |
6 | 59.975 | 374.647 | 39.924 | 948089 | 49.30 | 0.99 |
7 | 60.292 | 124.188 | 14.643 | 1152329 | 1.34 | 0.79 |
8:寶藿苷Ⅰ | 63.033 | 248.137 | 35.338 | 1901644 | 13.46 | 1.02 |
由圖2和表2中數(shù)據(jù)可知，供試品溶液色譜圖中呈現(xiàn) 8個特征峰，其中峰3、峰5和峰8分別與相應(yīng)對照品朝藿定C峰、淫羊藿苷峰和寶藿苷I峰的保留時間相對應(yīng)。按中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)計(jì)算，供試品特征圖譜與對照特征圖譜經(jīng)Mark峰相似度計(jì)算，相似度為0.959，滿足《炙淫羊藿（淫羊藿）配方顆粒》中相似度不得低于 0.90的要求。
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